如何混合HPLC(高效液相色谱)流动相溶剂以获得一致的结果?

单一溶剂很少满足使用HPLC高效液相色谱)进行分离的要求。在大多数情况下,需要混合两种或多种溶剂。在等度操作中,组成是预先确定的,并在分析过程中保持不变。另一方面,在梯度洗脱中,**终的溶剂组成与初始组成有很大不同,并且在分析过程中编程改变。
 
在等度模式下制备溶剂混合物并离线进行混合考虑将HPLC(高效液相色谱)流动相溶剂离线混合来讨论各种溶剂混合物理性质的作用。本文讨论采用相同混合实践以确保结果一致性的重要性。
 
化学计量混合是一个很少实现的目标。即使消除体积测量误差,混合热也会阻止溶剂的准确混合。热量形式的能量在溶剂的物理混合过程中被吸收或释放。这导致温度变化和溶剂混合体积的变化。甲醇和乙腈是高效液相色谱中常用的两种溶剂分离。甲醇在与水混合时会导致热量的丧失,从而增加混合后的体积。另一方面乙腈与水混合导致吸收热量,导致混合体积的冷却和收缩。这种组成变化导致混合物的极性发生显着变化,这些混合物在样品分子的分离特性方面具有可观察的变化。
 
溶剂混合实践
溶剂混合是一种容易拾取的基本操作。通常采用的两种混合做法是:
 
单独的体积测量
 
举一个例子,假设你需要准备一升含有60%水和40%甲醇的甲醇和水的混合物。在该方法中,在量筒中测量600ml水并转移到混合烧杯中。接着在量筒中测量400ml甲醇并将其转移到混合烧杯中的水中,搅拌混合物以均匀混合。由于混合过程中的温度升高将导致**终体积超过1000毫升。
 
混合体积补给
在这种方法中,您可以在量筒中测量600毫升水,然后用甲醇补足1000毫升的体积。然后将总体积转移到混合烧杯中进行均匀混合。
 
理论上这两种方法都满足混合溶剂的要求,但两种方法的体积变化都不同。因此重要的是采用相同的混合方法来实现分离的一致性。在缓冲液的情况下,在与有机相混合之前在水相中调节pH。
 
在线混合的情况下,将纯粹的流动面保存在不同的瓶子中,并在比例阀的配合下以所需的比例混合。通过软件对混合热进行校正后,可能接近化学计量混合。
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